Treg 細(xì)胞：Treg 細(xì)胞（也稱(chēng)作調(diào)節(jié)性T細(xì)胞或者是T調(diào)控細(xì)胞）是具有顯著免疫抑制性功能的細(xì)胞。它能夠抑制其他細(xì)胞的免疫應(yīng)答，在維持機(jī)體免疫平衡和預(yù)防自身免疫疾病、移植排斥方面發(fā)揮著重要作用。Treg 細(xì)胞特異性地表達(dá) CD4+ CD25+ Foxp3+， CD127 不表達(dá)或者弱表達(dá)。IL-2 和 TGF-β 是誘導(dǎo) Treg 主要的細(xì)胞因子。 

小鼠脾臟CD4+ T細(xì)胞Treg極化實(shí)驗(yàn)

1.根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法從小鼠脾臟中分離 naive  CD4+  CD25?  T 細(xì)胞。

2. anti-mouse  CD3ε 包被實(shí)驗(yàn)：在細(xì)胞培養(yǎng)板上，加入 anti-mouse  CD3ε,  clone  145-2C11  (10 μg/ml),。37℃ 孵育2小時(shí)或者4℃過(guò)夜。然后將液體輕輕地倒出，用無(wú)菌 PBS 進(jìn)行清洗3次，棄上清。

3.將分離出的 naive  CD4+  CD25?  T 細(xì)胞以 5 x105/ml 的濃度種于包被好的培養(yǎng)板中同時(shí)加入 anti-mouse  CD28, clone  37.51  (10 μg/ml)， TGF-β1  (5 ng/mL), IL-2 (10 ng/ml)進(jìn)行培養(yǎng)。

4.細(xì)胞培養(yǎng)3天后，收集細(xì)胞進(jìn)行清洗。然后進(jìn)行細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)相關(guān)材料

RBC  Lysis  Buffer  (cat.  # 420301)； Anti-mouse  CD3e (LEAF?  format,  cat. # 100314)， Anti-mouse  CD28  (LEAF?  format,  cat. # 102112)， Recombinant  Mouse  IL-2  (carrier-free)  (cat #575402)， Recombinant  human  TGF-β1  (carrier-free)  (cat.  # 580702)，  Brefeldin  A  (cat.  # 420601)， PdBu  (Phorbol  12,13-dibutyrate)  (cat.  # P1269  from  Sigma)

參考文獻(xiàn)：

1.Rahul Roychoudhuri，et al. 2013.Nature 498:506-510.  

2. Nicholas Arpaia，et al. 2013.Nature 504:451-455.

3. Steven Z. Josefowicz,et al.2012.Nature 482:395-399.

4.Emily B Heikamp,et al.2014 Nature Immunology 15:457-464.